血小板膜蛋白提取試劑盒

簡要描述：產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 血小板膜蛋白提取試劑盒適用于從各種動物血小板中提取膜蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

產品型號：
廠商性質：生產廠家
更新時間：2025-09-19
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CLASSIFICATION

蛋白質生物學

蛋白表達蛋白提取和裂解細胞器分離蛋白純化蛋白質濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學查看全部產品

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詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

動物血小板

產品特點

1.使用方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘。
2.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

產品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

1．提取液準備：
每500ul冷的蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
每500ul蛋白溶解液C中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2．取1-5ml ACD抗凝血，室溫200g離心10分鐘。
3．收集上層血漿，棄下層血液細胞沉淀。
4．上層血漿室溫3000g離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。
5．沉淀中加入500ul 提取液B洗滌一次，3000g離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。
6．沉淀中加入300-500ul冷的蛋白提取液A，充分混勻后，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
7．在4℃，12000g條件下離心10分鐘，取上清。
8．在37℃水浴10分鐘。
9．在37℃， 1000g離心3分鐘。
10．此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部的下層，大約30-50ul液體。
11．用1-2倍體積的膜蛋白溶解液C溶解該液體，即得血小板膜蛋白樣品。
12．將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
血小板膜蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大血小板的上樣量。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

4.膜蛋白電泳沒有條帶？
膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30分鐘。
蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。
有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。
電泳時最后采用低電壓低電流電泳。

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血小板膜蛋白提取試劑盒

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