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革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒(pull-down、co-IP等)

簡要描述:產品概述 product description

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2025-09-19
  • 訪  問  量:311

詳細介紹

保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態,從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完!
有效期
一年
檢測方法
Pull-down、co-IP等
適用樣本
革蘭氏陽性菌
產品特點
1.使用方便:不需昂貴設備。
2.可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3.將蛋白提取的時間縮短至1小時。
4.采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5.含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
6.紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
8.本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
產品應用
Pull-down、co-IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項:
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態,從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時間。
使用方法
1. 提取液的準備:
根據所需要提取的樣本量,每500 μl提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑和5 μl蛋白穩定液,充分混勻后置冰上備用。
2. 在4℃,10000×g條件下將菌液離心5分鐘,棄上清,盡量吸干剩余液體,收集菌體。
3. 用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進行下面操作步驟即可。
4. 按每100 mg濕重菌體樣本加入500 μl蛋白提取液,吹打混勻,冰上放置20-30分鐘。
5. 在150-300 w,10 s超聲/10 s間隔條件下冰浴超聲至菌液變清。
6. 在4℃,12000×g條件下將提取液離心5分鐘,棄沉淀,收集上清。
7. 將上清移入另一干凈離心管,即得革蘭氏陽性菌蛋白樣品。
8. 將總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析
1.蛋白濃度低?
處理部分樣本時可能沒有裂解,導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。部分革蘭氏陽性菌可能較難裂解,進行超聲處理。

2.用什么方法定量蛋白?
建議用BCA法。不適合用Bradford法,因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份,導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎?
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結構,沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構象和活性。
參考文獻
1.HaiFeng Su et al.
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 (IF=8.355)

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A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 (IF=5.128)

3.H Shi et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 (IF=11.698)

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