細胞核蛋白提取試劑盒

簡要描述：貝博® BBproExtra® 細胞核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細胞等動物細胞中提取核蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

產品型號：
廠商性質：生產廠家
更新時間：2025-09-19
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蛋白質生物學

蛋白表達蛋白提取和裂解細胞器分離蛋白純化蛋白質濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學查看全部產品

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貝博® BBproExtra® 細胞核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細胞等動物細胞中提取核蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞核膜組份。

細胞核蛋白提取試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。如果下游應用是金屬螯和層析等不能含EDTA試劑的實驗，可以聯(lián)系貝博更換不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

動物細胞

產品特點

1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

細胞核蛋白提取
1.提取液制備：
每200ul冷的蛋白提取液A加入1ul蛋白酶抑制劑混合物和1ul磷酸酶抑制劑。每200ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制劑混合物和1ul磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。
2.收集細胞。
3.用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4.每20ul細胞壓積（細胞沉淀體積）中加入100-200μl冷的提取液 A，充分吹打混勻，置2-8℃條件振蕩15-30分鐘。
5.再次混勻，然后在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。
6.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br/>7.沉淀用PBS洗滌一次，在4℃，5000×g條件下離心5分鐘，棄上清，留沉淀。
8.在沉淀中加入80-200μl冷的提取液B，高速渦旋振蕩15秒。
9.置2-8℃條件振蕩30-40分鐘。
10.在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
11.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。
12.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br/>

常見問題分析

1.核蛋白濃度低？
核蛋白豐度較低，需要足夠細胞數(shù)量提取，在條件允許的情況下，盡可能加大細胞量。
注意用蛋白提取液B處理時沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑B的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻，至無明顯沉淀。
如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則需要采用超聲處理。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

參考文獻

1.Pingli Li et al.
Preparation and in vitro immunomodulatory effect of curdlan sulfate
Carbohydrate Polymers 2014 （IF=7.182）

2.Guang Yu et al.
Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease
Neurobiology of Aging 2013 （IF=6.189）

3.Wan Li et al.
Anti-inflammatory effects of Morchella esculenta polysaccharide and its derivatives in fine particulate matter-treated NR8383 cells
International Journal of Biological Macromolecules 2019 （IF=5.162）

4.Mengjuan Wu et al.
Phosphorylation of SET mediates apoptosis via P53 hyperactivation and NM23-H1 nuclear import
Neurobiology of Aging 2018 （IF=5.117）

5.Xiaoling Ma et al.
Staphylococcal Panton-Valentine Leukocidin Induces Pro-Inflammatory Cytokine Production and Nuclear Factor-Kappa B Activation in Neutrophils
PloS one 2012 （IF=4.411）

6.Jinchun Qian et al.
Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
Journal of Ethnopharmacology 2010 （IF=3.69）

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