2-8℃ 避光

開蓋后組份按要求條件保存。

6個(gè)月

分光光度計(jì)

血清、血漿、動(dòng)物組織

1. 快速簡便：全程約50分鐘，可測(cè)100例左右樣本。
2. 取樣量微：本法取樣本量約為150μl。
3. 穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個(gè)月有效。
4. 再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。
5. 回收試驗(yàn)： X =103.3%。
6. 受外界影響因素小：干擾因素少，重復(fù)性強(qiáng)。
7. 測(cè)試面廣：可測(cè)動(dòng)物血清（漿）、動(dòng)物組織等，效果均佳。

分光光度計(jì)

1.分光光度計(jì)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.比色皿

1.純水
2.冰醋酸
3.95%乙醇或無水乙醇
4.蛋白定量試劑盒（組織樣本）

1.吸頭
2.一次性手套
3.離心管

1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
2.標(biāo)準(zhǔn)品易氧化，因此，在樣本上清液制備好后再配置標(biāo)準(zhǔn)溶液，并在10min內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)；

一、試劑配制：
1. 試劑A工作液的配制：
臨用前按試劑A：純水=1:14稀釋，混勻備用；
2. 試劑B工作液的配制：
臨用前將1支粉劑加0.36ml的冰醋酸再加純水至40ml，溶解，4℃保存?zhèn)溆茫?br>3. 試劑C工作液的配制：
因較難溶解，臨用前2~4小時(shí)加95%乙醇或無水乙醇60ml充分溶解，4℃保存?zhèn)溆茫?br>4. 試劑D工作液的配制：
臨用前取0.15ml試劑D加純水至25ml（需現(xiàn)配現(xiàn)用）；
5. 600μg/ml Vc標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制：
將1支Vc標(biāo)準(zhǔn)品粉劑溶于10ml試劑A工作液，即可；
6. 6μg/ml Vc標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制：
取600μg/ml Vc標(biāo)準(zhǔn)品工作液再用試劑A工作液100倍稀釋即可，需現(xiàn)配現(xiàn)用；
【注】：
? 標(biāo)準(zhǔn)品易氧化，因此，在樣本上清液制備好后再配置標(biāo)準(zhǔn)溶液，并在10min內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)；

二、樣本的前處理：
上清液的制備：取待測(cè)樣本0.15ml加試劑A工作液0.45ml，漩渦混勻，放置15min后離心，3500~4000轉(zhuǎn)/分，離心10min，上層清亮液體為上清液；
【注】：
? 組織樣本處理：準(zhǔn)確稱取組織質(zhì)量，用生理鹽水為勻漿介質(zhì)制備10%組織勻漿（腦組織制備成20%勻漿），每100mg組織加入900μl生理鹽水，用勻漿器充分勻漿，1000g離心10分鐘取上清，然后按上述步驟處理。
? 組織樣本測(cè)定需要進(jìn)行蛋白定量。

三、樣本的測(cè)定：

充分混勻，靜置10min，波長536nm，光徑1cm（或0.5cm’），純水調(diào)零，測(cè)定各管的吸光度值。

四、計(jì)算公式：
1、血清（漿）樣本的計(jì)算公式：
Vc含量 = 樣品OD值 - 空白OD值 x 標(biāo)準(zhǔn)濃度 x 樣本前處理
（μg/ml） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （6μg/ml） 稀釋倍數(shù)（4倍）

2、組織樣本的計(jì)算公式：
Vc含量 = 樣品OD值 - 空白OD值 x 標(biāo)準(zhǔn)濃度 x 樣本測(cè)試前
（μg/mgprot）標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （6μg/ml） 稀釋倍數(shù)（4倍）

÷待測(cè)勻漿蛋白濃度
（mgprot/ml）