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細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒

簡要描述:產品概述 product description 貝博® BBcellProbe® 細胞周期檢測試劑盒是利用細胞內DNA能夠和熒光染料結合的特性,細胞各個時期其DNA含量不同從而結合的熒光染料不同,流式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣來檢測細胞周期。 細胞周期(cell cycle)是指細胞從前一次分裂結束起到下一次分裂結束為止的活動過程,通常由G0/G1期、S期、G2期和M期組成。G1期:細胞開始RNA和蛋白質的合成,但DNA含量仍保持二倍體。S期:DNA開始合成,這時細胞核內DNA的含量介于G1期和G2期之間。當DNA復制結束成為4倍體時,細胞進入G2期。G2期的細胞繼續合成RNA及蛋白質,直到進入M期。因此,單純從DNA含量無法區分G2期和M期。一旦有絲分裂發生,細胞分裂成兩個細胞,這兩個細胞或者進入下一個細胞周期......

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2025-09-24
  • 訪  問  量:152

詳細介紹

保存溫度
-20℃避光
注意事項
1.染液短期2周內可以2-8℃保存。染料長期不用可以-20℃保存。避免反復凍融。
2.試劑拆封后請盡快使用完!

有效期
1年
檢測方法
流式細胞儀
適用樣本
1.懸浮細胞 2.貼壁細胞
產品應用
流式細胞儀
儀器準備
1.流式細胞儀
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
試劑準備
1.PBS 緩沖液(pH7.4,實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
1.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
2.使用含EDTA的細胞消化液。
3.洗滌細胞離心轉速不可超過800×g。
4.乙醇固定時離心大概采用2000×g力5分鐘,離心力太小可能部分細胞難以沉淀。? 5.固定時在振蕩器上輕輕振蕩細胞,并緩慢滴加75%乙醇,直接加入會導致細胞團聚的現象,很難重懸成單細胞。或者先用冷PBS懸浮細胞,充分懸浮,使細胞充分分散成單細胞。之后緩慢加入無水乙醇,終濃度為70-90%乙醇。乙醇固定之后須無細胞沉淀。


使用方法
1. 收集樣本細胞,細胞數量在1-5*106個。
2. 用冷PBS洗滌細胞兩次。
3. 在15ml離心管中,用500 μl PBS重懸細胞。
4. 慢慢滴加冷的無水乙醇或95%乙醇至終濃度為70%-80%冰凍乙醇。-20℃固定1小時或4℃固定過夜。
5. 在1000g離心10分鐘,棄上清,收集細胞。
6. 用冷PBS洗滌細胞一次。
7. 用500 μl冷PBS重懸細胞。
8. 加入Rnase A溶液20 μl, 37℃水浴30分鐘。
9. 400目篩網過濾。
10. 在1000g離心10分鐘,棄上清,收集細胞。
11. 加入400 μl PI染液重懸細胞,輕輕混勻后4℃避光孵育30分鐘-1小時。
12. 流式檢測結果。激發波長為488nm。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。
常見問題分析
1.染色后找不到細胞?
固定細胞可能難以離心沉淀;固定細胞可能成團;固定細胞膜容易損傷成碎片。操作過程中注意以上幾點。

2.可以不固定細胞嗎?
本試劑盒可以用于非固定細胞的周期檢測。
參考文獻
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Journal of Experimental & Clinical Cancer Research 2015 (IF 6.217)

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